吖啶橙
吖啶橙：3，6－（二甲胺基）吖盐酸盐，分子式C17H19N3·HCl·ZnCl₂，分子量438.12g/摩尔，是一种荧光色素，其检测激发滤光片波长488nm，阻断滤光片波长515nm。它与细胞中脱氧核糖核酸和核糖核酸结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA结合量多发桔黄色或桔红色荧光。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。它还可以用作移码突变的诱变剂，能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，这样在脱氧核糖核酸复制过程中，会使DNA链增加或缺失一个碱基，造成移码突变。吖啶橙染液有毒，操作时要戴手套，需避光。
2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，吖啶橙在3类致癌物（现有证据未能对人类致癌性进行分级评价）清单中。
简介
简称：AO
AO能与无机酸形成盐，具有绿色荧光。如果再稀释的话，便水解成游离的AO，而呈现紫色荧光。
吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色测定PC12细胞凋亡（吖啶 橙色/ethidium 溴化物, AO/EB）：
（1）细胞爬片：在6孔培养板中预先置入玻璃盖玻片，接种细胞悬液，干预后，予95%乙醇固定15分钟，微干，然后准备荧光染色。将100mg/L溶于pbs的吖啶橙和100mg/L溶于PBS的溴化乙锭各5μl（临用前混合加入，加样量宜小，有时各2μl-5μl足够，量太大容易形成细胞凋亡的假阳性），在照相前混匀后加入，轻轻吹打，30秒后用激光共聚焦显微镜观察照相。（有人用15mg吖啶橙溶于100ml pH6.8的PBS中过滤，避光保存）计取5个视野，共100个细胞中凋亡细胞百分数。
（2）如制成细胞悬液：取100μl PBS稀释的细胞悬液，加2μl的染色液，其中AO/EB，各含100μg/ml，加入染料30秒后观察摄像。
主要用途
用作荧光指示剂，肿瘤细胞及细菌、核酸染色剂及移码突变的诱变剂。
吖啶橙是一种荧光色素，吖啶橙激发滤光片波长488nm。阻断滤光片波长515nm。吖啶橙与细胞中脱氧核糖核酸和核糖核酸结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光（即着色特异性），这是由于DNA是个高度聚合物，吸收荧光物质的位置较少，发绿色荧光，而RNA聚合度低，能和荧光物质结合的位置多，故发红色荧光。
质量标准
项目 电泳级
λmax.,50%EtOH:490-495 nm
E 1%/1 cm,λmax.:\u003e1200(EtOH 50%)
干燥损失Loss on drying:≤5%
pH(1%;H2O):约4.0(20°C)
品级Grade分子生物学级,≥80.0%
(for molecular biology，Dye Content≥80.0%（HPLC))
红外光谱Infrared spectrum Conforms to Structure
水溶性Solubility c=1mg/ml;液态水，Dark Orange to Amber，Clear
氮Nitrogen 8.5-12.5%
染料含量Dye Content(HPLC)≥80.0%
物化性质
橙色粉末。溶于水、乙醇。溶液为橙黄色带绿色荧光。pH值为8.4～10.4则无荧光。能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，使部分双螺旋脱氧核糖核酸松开，该两个碱基对的距离拉大一倍。这样的DNA复制过程中，会使DNA链增加或缺失一个碱基，造成移码突变。
熔点:165℃
相对密度:-
溶解性:soluble
安全信息
致癌物说明
国际癌症研究所（IARC）对已进行致癌研究的化学物分为四类：一类，对人致癌性证据充分；二类，A组对人致癌性证据有限，但对动物致癌性证据充分，B组人致癌性证据有限，对动物致癌性证据也不充分；三类，现有证据未能对人类致癌性进行分级评价；四类，对人可能是非致癌物。
参考资料
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