新冠病毒检测
新冠病毒检测，指的是通过核酸、抗原或抗体等分子检测手段对人体是否感染类SARS病毒或者患有新型冠状病毒病（COVID-19）予以诊断。
病毒简介
新型正冠状病毒亚科属于β属冠状病毒，基因特征与SARSr-CoV和MERSr-CoV有明显区别。病毒对紫外线和热敏感，56℃ 30分钟、乙醚、75%乙醇、含氯消毒剂、过氧乙酸和三氯甲烷等脂溶剂均可有效灭活病毒。基于目前的流行病学调查和研究结果，潜伏期为1-14天，多为3-7天；传染源主要是新型冠状病毒感染的患者，无症状感染者也可能成为传染源；主要传播途径为经呼吸道飞沫和接触传播，在相对封闭的环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况下存在经气溶胶传播的可能，其他传播途径尚待明确；人群普遍易感。
标本采集
临床标本
采集的临床标本包括病人的上呼吸道标本（如鼻咽拭子、咽拭子等）、下呼吸道标本（如深咳痰液、肺泡灌洗液、支气管灌洗液、呼吸道吸取物等）、粪便/肛拭子标本、抗凝血药和血清标本等。为提高核酸检测阳性率，应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本，留取痰液，实施气管插管时采集下呼吸道分泌物，标本采集后尽快送检。
标本采集、运送、存储和检测暂按二类高致病性病原微生物管理，按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》及《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》（卫生部令第45号）及其他相关要求执行。
标本种类
1.上呼吸道标本：包括鼻咽拭子、咽拭子等。
2.下呼吸道标本：深咳痰液、肺泡灌洗液、支气管灌洗液、呼吸道吸取物等。
3.便标本：留取粪便标本约10克（花生大小），如果不便于留取便标本，可采集肛拭子。
4.血液标本：尽量集发病后7天内的急性期抗凝血药，采集量5ml,建议使用含有乙二胺四乙酸二钠抗凝剂的真空釆血管采集血液。
5.血清标本：尽量釆集急性期、恢复期双份血清。第一份血清应尽早（最好在发病后7天内）釆集，第二份血清应在发病后第3～4周釆集。采集量5ml，建议使用无抗凝剂的真空釆血管。血清标本主要用于抗体的测定，不进行核酸检测。
采集方式
1.鼻咽拭子：采样人员一手轻扶被采集人员的头部，一手执拭子，拭子贴鼻孔进入，沿下鼻道的底部向后缓缓深入，由于鼻道呈弧形，不可用力过猛，以免发生外伤出血。待拭子顶端到达鼻咽腔后壁时，轻轻旋转一周（如遇反射性咳嗽，应停留片刻），然后缓缓取出拭子，将拭子头浸入含2～3ml病毒保存液（也可使用等渗盐溶液、组织培养液或磷酸盐缓冲液）的管中，尾部弃去，旋紧管盖。
2.咽拭子：被采集人员先用生理盐水漱口，采样人员将拭子放入无菌生理盐水中湿润（禁止将拭子放入病毒保存液中，避免抗生素引起过敏），被采集人员头部微仰，嘴张大，并发“啊”音，露出两侧咽扁桃体，将拭子越过舌根，在被采集者两侧咽扁桃体稍微用力来回擦拭至少3次，然后再在咽后壁上下擦拭至少3次，将拭子头浸入含2～3ml病毒保存液（也可使用等渗盐溶液、组织培养液或磷酸盐缓冲液）的管中，尾部弃去，旋紧管盖。咽拭子也可与鼻咽拭子放置于同一管中。
3.鼻咽抽取物或呼吸道抽取物：用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从气管抽取呼吸道分泌物。将收集器头部插入鼻腔或气管，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出，收集抽取的粘液，并用3ml采样液冲洗收集器1次（亦可用小儿导尿管接在50ml注射器上来替代收集器）。
4.深咳痰液：要求病人深咳后，将咳出的痰液收集于含3ml采样液的50ml螺口塑料管中。如果痰液未收集于采样液中，可在检测前，加入2～3ml采样液，或加入痰液等体积的痰消化液。
5.支气管灌洗液：将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管（约30cm深处），注入5ml生理盐水，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液冲洗收集器1次（亦可用小儿导尿管接在50ml注射器上来替代收集）。
6.肺泡灌洗液：局部麻醉后将纤维支气管镜通过口或鼻经过咽部插入右肺中叶或左肺舌段的支管，将其顶端契入支气管分支开口，经气管活检孔缓缓加入灭菌生理盐水，每次30～50ml，总量100～250ml，不应超过300ml。
7.粪便标本：取1ml标本处理液，挑取黄豆粒大小的便标本加至管中，轻轻吹吸3-5次，室温静置10分钟，以8000rpm离心5分钟，吸取上清液进行检测。
粪便标本处理液可自行配制：1.211gTris，8.5g氯化钠，1.1g氯化钙或1.47g含结晶水的氯化钙，溶解至800ml去离子水中，用浓盐酸调节pH为7.5，以去离子水补充至1000ml。也可使用HANK’S液或其它等渗盐溶液、组织培养液或磷酸盐缓冲液溶解便标本制备便悬液。如患者出现腹泻症状，则留取粪便标本3～5ml，轻轻吹打混匀后，以8000rpm离心5分钟，吸取上清液备用。
7.肛拭子：用消毒棉拭子轻轻插入肛门3～5cm，再轻轻旋转拔出，立即放入含有3～5ml病毒保存液的15ml外螺旋盖采样管中，弃去尾部，旋紧管盖。
8.血液标本：建议使用含有乙二胺四乙酸二钠抗凝剂的真空釆血管采集血液标本5ml，根据所选用核酸提取试剂的类型确定以全血或血浆进行核酸提取。如需分离血浆，将全血1500～2000rpm离心10分钟，收集上清于无菌螺口塑料管中。
9.血清标本：用真空负压采血管采集血液标本5ml，室温静置30分钟，1500～2000rpm离心10分钟，收集血清于无菌螺口塑料管中。
其他材料：依据设计需求规范采集。
标本包装
标本采集后在生物安全二级实验室生物安全柜内分装。
1.所有标本应放在大小适合的带螺旋盖内有垫圈、耐冷冻的样本采集管里，拧紧。容器外注明样本编号、种类、姓名及采样日期。
2.将密闭后的标本装入密封袋，每袋限一份标本。样本包装要求要符合《危险品航空安全运输技术细则》相应的标准。
3.涉及外部标本运输的，应根据标本类型，按照A类或B类感染性物质进行三层包装。
标本保存
用于病毒分离和核酸检测的标本应尽快进行检测，能在24小时内检测的标本可置于4℃保存；24小时内无法检测的标本则应置于-70℃或以下保存（如无-70℃保存条件，则于-20℃冰箱暂存）。血清可在4℃存放3天，-20℃以下可长期保存。应设立专库或专柜单独保存标本。标本运送期间应避免反复冻融。
标本送检
标本采集后应尽快送往实验室，如果需要长途运输，建议采用干冰等制冷方式进行保藏。
核酸测定
检测方法
新型冠状病毒感染的常规检测方法为实时荧光RT-PCR。任何类SARS病毒的检测都必须在具备条件的实验室由经过相关技术安全培训的人员进行操作。本指南中的核酸检测方法主要针对新型冠状病毒基因组中开放读码框1ab（openreadingframe1ab，ORF1ab）和核壳蛋白（nucleocapsidprotein，N）。
满足条件
1.同一份标本中新型冠状病毒2个靶标（ORF1ab、N）实时荧光RT-PCR检测结果均为阳性。如果出现单个靶标阳性的检测结果，则需要重新采样，重新检测。如果仍然为单靶标阳性，判定为阳性。
2.两种标本实时荧光RT-PCR同时出现单靶标阳性，或同种类型标本两次采样检测中均出现单个靶标阳性的检测结果，可判定为阳性。
核酸检测结果阴性不能排除新型冠状病毒感染，需要排除可能产生假阴性的因素，包括：样本质量差，比如口咽等部位的呼吸道样本；样本收集的过早或过晚；没有正确的保存、运输和处理样本；技术本身存在的原因，如病毒变异、PCR抑制等。
检测项目
推荐选用针对类SARS病毒的ORF1ab、N基因区域的引物和探针。
靶标一（OR一级方程式锦标赛ab）：
正向引物（F）：CCCTGTGGGTTTTACACTTAA
反向引物（R）：ACGATTGTGCATCAGCTGA
荧光探针（P）：5'-FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-BHQ1-3'
靶标二（N）：
正向引物（F）：GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT
反向引物（R）：CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG
荧光探针（P）：5'-FAM-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-TAMRA-3'
核酸提取和实时荧光RT-PCR反应体系及反应条件参考相关厂家试剂盒说明。
结果判断
阴性：无Ct值或Ct≥40。
阳性：Ct值\u003c37，可报告为阳性。
灰度区：Ct值在37-40之间，建议重复实验，若重做结果Ct值\u003c40，扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性,否则为阴性。
注：如果用的是商品化试剂盒，则以厂家提供的说明书为准。
抗体检测
抗体检测是看血液里面是否有新冠病毒的抗体，新冠病毒感染3至5天后，IgM抗体可以出现阳性，提示近期急性感染；IgG抗体阳性则表示过去有过感染，已经有了免疫力。
参考资料
新型冠状病毒肺炎防控方案（第五版）.乌兰察布市卫生健康委员会.2022-12-14
新冠病毒核酸检测、抗体检测及结果解读.今日头条-光明网.2022-12-14