TRIzol

TRIzol试剂是一种含有异硫氰酸胍和酚的单相液，能迅破碎细胞并制细胞释放出的核酸酶。可从多种生物样品中分离高质量总核糖核酸或同时分离RNA、脱氧核糖核酸和蛋白。解耦联剂异硫酸胍是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，并使蛋白质二级结构消失，细胞结构降解，核蛋白解离。酚裂解细胞，使细胞中的蛋白质和核酸解聚。酚还变性蛋白质，部分抑制RNA酶活性。

组成与工作原理

Trizol试剂是一种含有水饱和酚，8-羟基喹啉、异硫氰酸胍，β-2-巯基乙醇等成分的混合物。其工作原理是首先通过苯酚、异硫氰酸胍裂解细胞，异硫氰酸胍它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来,又对核糖核酸酶有强烈的变性作用，使细胞中的RNA释放;8-羟基啉、异硫氰酸胍、β-基乙醇等可以抑制RNA酶活性，保护RNA完整性。随后加入的三氯甲烷则促使细胞裂解液分层,脱氧核糖核酸、蛋白质与苯酚结合后存在于下层的氯仿有机相，而核糖核酸存在与上层的水相，从而实现RNA的分离与提取。上层水相中的RNA，经过2-丙醇与乙醇的多步沉淀与洗涤,去除盐杂质以及多余的水,得到纯化的RNA分子,最后使用琼脂糖凝胶电泳检测所提纯的总RNA浓度以及完整性用核酸测定仪进行精确定量。

基本特点

制备方法

除了购买成品TRIzol试剂，也可以自己配置TRIzol溶液。在的烧杯中加入25.77%的无RNase超纯水，然后依次加入22%的异硫氰酸胍、1.54%的柠檬酸钠溶液(pH≥7)，2.32%的十二烷基肌氨酸钠溶液(Sarcosy)，4.40%的醋酸钠溶液(pH≥4)，混合均匀，最后加入44%的重蒸苯酚，混合均匀。（注意：TRIzol需4℃低温保存，保质期约一年）。

应用领域

TRIzol™试剂一般应用于实时荧光定量PCR(qPCR)，反转录酶PCR(RT-PCR)，cDNA文库构建，核酸酶保护测定，Northern 印迹，克隆。

TRIzol™试剂可很好地处理少量组织(50–100mg)和细胞(5×106)以及大量组织(≥1g)和细胞(\u003e107)，且包含用于从人、动物、植物或细菌来源的样品中进行纯化的方案。TRIzol™试剂通过在样品均质化期间高效抑制RNase活性来维持核糖核酸的完整性，同时破坏细胞并溶解细胞组分。TRIzol™试剂方法的简单性使其可同时处理大量样品。整个程序可在1小时内完成。通过TRIzol™试剂分离的总RNA不含蛋白和脱氧核糖核酸污染。

TRIzol™试剂可以连续沉淀单份样品中的RNA、DNA和蛋白。使用TRIzol™试剂均质化样品后，加入三氯甲烷，使匀浆分离成透明的上层水层（含RNA）、中间相和红色下层有机层（含DNA和蛋白）。使用2-丙醇从水层中沉淀出核糖核酸。使用乙醇从中间相/有机层中沉淀出DNA。通过异丙醇沉淀从苯酚乙醇上清液中沉淀出蛋白。洗涤沉淀出的核糖核酸、DNA或蛋白以去除杂质，然后复溶以用于下游应用。

注意事项

危害健康

TRIzol对人体有害，使用时应戴一次性手套，注意防止溅出。如果接触到TRIzol试剂，需要立即使用大量去垢剂和水冲洗。该试剂还含有酚类和疏基乙醇等成分，具有特殊气味，请于吸取试剂溶液后马上盖好瓶盖，或于通风橱中操作。

储存事宜

请将TRIzol试剂储存于2~8℃，有效期为3年。注意：不同生产厂家生产的TRIzol试剂会有不同要求，具体储存方法可以参考使用说明。

相关历史

研发历史

TRIzol™试剂是以ChomczyńSKI与Sacchi在1987年提出的一步分离核糖核酸法为基础发明的。Chomczy日本精工将此方法申请了专利。（专利号4,843,155/5,346,994）

相关公司

TRIzol为由生命科技（Life Technologies）持有的商标，由生命科技（Life Technologies）所生产的分离RNA、脱氧核糖核酸、蛋白质的试剂名为TRIzol试剂。生命科技公司于2014年1月被赛默飞（Thermo Fisher Scientific）收购

MRC，MRC生产的分离核糖核酸、DNA、蛋白质的试剂名为TRI Reagent（Reagent，意为「试剂」）

参考资料

TRIzol™ 试剂.生命科技官网.2023-11-12

TRIZoI试剂使用说明.杭州新景生物试剂开发有限公司.2023-11-20

TRIZoI试剂使用说明.天津三箭生物技术股份有限公司.2023-11-20

US5346994A.美国专利网站.2023-11-20

Life Technologies.赛默飞官网.2023-11-20

TRI Reagent® RT (RT 111).MRC官网.2023-11-12